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常见微生物的灭菌方法

更新时间:2016-06-28   点击次数:7107次

 

常用灭菌法

1)干热灭菌法 常见的有火焰、烧灼、干烤和红外线灭菌等。

①火焰、烧灼:通常用于实验室无菌操作中金属或其它耐火材料制成的器具的灭菌。

②干烤和红外线:利用干热空气或热辐射进行灭菌。一般135~145℃需3~5h,160~170℃需2h以

上,170~180℃需1h以上,180~200℃需0.5~1h。除热原则需250℃30min,或

200℃45min180℃2h。空气传热慢,穿透力不强,故干热灭菌时间长。干热灭菌时烤箱内装入物

品应留有隙,以利空气流动,否则使箱内温度不均,部分物品灭菌不*。

2)湿热灭菌法 通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭微生物的方法。湿热穿透

力强,灭菌效果较干热好。

①煮沸或流通蒸汽灭菌:常压下沸水和蒸汽的温度是100℃,一般处理30~60min可杀死细菌繁体,但不能*杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。

②低温间隙灭菌(巴斯德灭菌法):将物品先用60~80℃加热(或煮沸)1h,然后置20~25℃保

存24h(或常温过),使其中残存的芽孢萌发成繁殖体,再用以上条件灭菌,如此反复三次。

本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品,但很费时。

③高压蒸汽灭菌(热压灭菌法):超过一个大气压时,水的沸点高于100℃,反之亦然.高压蒸

汽灭菌就是通过加压提高蒸汽温度,灭菌效果。它简便、经济、可靠、无毒,是zui可靠、

应用zui广泛的灭菌法。此法适用于耐高温和潮湿的物品。

常用条件为:

115.5℃         30min

121.5℃         20min

126.5℃         15min

注意事项:

a. 必须*排出灭菌器内的空气。否则会影响灭菌器内温度达到规定的要求。

b. 注意被灭菌物品的温度。灭菌器内温度与被灭菌物品的温度一般是一致的,但在蒸汽输入过

快时,后者可能低于前者,所以升温时要有一定的预热时间。另外,降温过快易引起玻璃炸

裂。因此,对于一种灭菌产品应制定一固定的灭菌曲线(象冻干曲线一样)。

c. 定期检查灭菌器内温度的准确性。

3)化学灭菌法 利用化学试剂形成的气体来杀灭微生物的方法。

常用的灭菌剂为环氧乙烷(又称氧化乙烯)。环氧乙烷是广谱杀菌剂,能杀灭细菌、芽孢和多

种病毒,还能杀死昆虫及虫卵。但由于环氧乙烷易燃易爆且有毒(有致变异性),用于药品方

面极有限,多用于医疗器械、塑料制品等灭菌。(不能用于橡胶和乳胶手套,能将其溶解。)

4)滤过除菌法 利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理,除去对热不稳定的药品溶液或液体

物质中的细菌的方法。过滤法一般只能除菌,不能除去支原体和病毒。过滤除菌的效果与滤膜

的性能、孔径的大小、密度、滤膜的厚度等因素有关。

滤过除菌法要求zui终过滤的滤膜孔径为0.22μm。由于各厂家生产的相同规格的滤膜质量并不一

致,为了保证除菌效果,在使用前后应检查滤器的完好性(如压力维持试验或起泡点试验)。

一个过滤器的使用时间应根据品种验证后确定,一般不应超过8小时。

5)辐射灭菌法 辐射有两种类型:一种是电磁波辐射,如紫外线、红外线、微波;一种是电

离辐射,如可引起被照射物电离的X射线、γ射线。

①紫外线:紫外光波长在136~390nm之间,其中260nm左右能破坏核酸,杀菌作用zui强。另外,

空气中的氧受紫外线照射后,可微量转变为臭氧共同起杀菌作用。紫外线消毒的效果与光源的

功率、光源与被照射物的距离、照射时间、温度和湿度等因素有关。我国规定紫外灯照射强度

在距离1m处不低于70μW/cm2(以紫外线测强仪测定)。在操作面上要求强度达40μW/cm2以

上。一般每10m2装30W灯管1支,工作前开30~60min。

紫外灯的输出功率随使用时间增加而降低。国产紫外灯的平均寿命(点到70%额定功率的时间)

一般为2000h,超过平均寿命时,就达不到预期效果,必须更换。

紫外线的穿透力很弱,不能穿透一般包装材料,如玻璃、塑料薄膜、纸等。玻璃能强烈吸收小

于350nm的紫外线,石英玻璃能吸收小于200nm的紫外线。因此,它主要用于空气和物体表面消

毒,特制的紫外灯装置也可用于水的消毒。紫外线对眼、皮肤有损坏,照射过程中产生的臭氧

对眼、鼻腔有刺激,臭氧过多时使人头晕、胸闷、血压下降。

②红外线:通过加热碳化硅板产生的辐射热能,由空气传导加热灭菌。如红外线烤箱,温度可

达180℃左右。热效应特点是由表及里。

③微波:微波灭菌主要是因其热效应。微波加热升温快,温度高且均匀,杀菌作用强。热效应

特点是由里及表。不同性质的物品吸收微波的能力不同,其热效应和消毒效果也不同。微波有

一定穿透力,但不强。微波对人体有害,要注意防护。

④60Co灭菌:放射性同位素60Co(或137Cs)衰变时可放射出γ射线,γ射线的能量高、穿透力

强,可使细胞内各种活性物质发生化学变化,从而使细菌损伤或死亡。

经60Co辐射灭菌的物品温度升高很少,一般仅约5℃,故又称“冷灭菌”。60Co辐射存在两个方

面的安全问题:一是辐射的直接作用。γ射线对人体细胞同样有害;二是经过辐射的食品、药

品的安全性。1984年美国农业部食品安全实验室用辐射处理的鸡肉喂饲小鼠,发现患**肿瘤增

加,包括加重癌病损害。因此60Co辐射用于食品和药品都应经过安全试验,进行科学的、全面

的评价